PCR扩增中，引物的设计是很重要的一部分，那么如何用primer5设计引物呢，下面给大家分享一下我的经验：

工具/原料

primer5

基因序列

方法/步骤

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先在NCBI这个网站上找到自己需要的基因序列，mRNA或者DNA都可。



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如下，是我找的大鼠肥大细胞MrgB3基因的NCBI序列。



3

运行Primer 5.exe。



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点击左上角File-New-DNA Sequence。



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得到下面这个页面，将自己得到的DNA或者RNA粘贴至空白处。



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粘贴之后会弹出窗口，系统自动选择“As is”，直接点击OK即可。



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粘贴成功，点击“primer”，在左上方弹出窗口，选择“search”，弹出引物搜索框，其他选项一般不需要更改，如果需要的产物长度有些要求可以更改，如果无需更改，或者更改完毕后点击“OK”。



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自动搜索完毕后，弹出下面这个窗口，点击“OK”，右上角出现搜索结果，并且按系统评分排序，共一百对引物。



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点击某一行结果，在左上角的“引物窗口”中，会显示该引物的详细信息。



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通过对比查看引物，从中选择合适的引物：在搜索结果框中该引物一行的方框后打对勾。点击Fuction-Save to datebase，弹出“primer database ”对话框，点击自己要加的引物序列，点击“Export”，引物序列就会在“Primers”下方出现，点击“Save”，以后即可查看。



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如果合适的引物就一两个，也可以直接用虚拟打印机转化成pdf格式。前提是要有一个虚拟打印机的软件，我用的是bio PDF软件。点击合适的引物，点击File-Print-Current Pair，弹出“Print primer”窗口，点击“print”。



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弹出“打印设置”选项，直接确定即可，弹出PDF生成文件，点击“保存”，在桌面上就有了该pdf文件，文件里面记录该序列详细信息。

END

注意事项

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